/dfiles/11404/images/head.jpg

免疫组化的问题及解决方法
[日期:2009-11-21]  来源:  作者: 
 

1 、染色过强

原因和解决办法

抗体的浓度过高或抗体孵育时间过长 ? 降低抗体滴度(一般指浓缩性抗体)抗体孵育时间:室温 1 小时或 4 ℃ 过夜孵育温度过高,孵育温度超过 37 ℃ ? 一般室温 20 -28 ℃ .DAB 显色时间过长或 DAB 浓度过高 ? 显色时间不能超过 5-10 分钟,以显微镜下观察为准。

2 、非特异性背景染色 ?

原因和解决办法

操作过程中冲洗不充分 ? 每步冲洗 3 × 5 , 组织中含过氧化物酶未阻断,可再配置新鲜 3%H2O2 封闭,孵育时间延长 , 组织中含内源性生物素,正常非免疫动物血清再封闭 , 血清蛋白封闭不充分 ? 延长血清蛋白封闭时间。

3 、染色弱

原因和解决办法

抗体浓度过低,孵育时间过短 ? 提高抗体浓度,孵育时间不能少于 60 分钟 , 试剂超过有效使用期 ? 及时更换试剂 , 操作中,滴加试剂时缓冲液未沥干,致使试剂稀释 ? 每步滴加试剂前沥干切片中多余的缓冲液(但防止切片干燥) , 室温太低,低于 15 ℃ ,若室温低于 15 度,要改放在 37 ℃ 孵育箱孵育 30-60 分钟(或 4 ℃ 冰箱过夜) , 蛋白封闭过度 ? 封闭时间不要超过 10 分钟。

4 、染色阴性

原因和解决办法

操作步骤错误:重新试验,设立阳性对照;组织中无抗原:设立阳性对照片,以验证实验结果 ;一抗与二抗种属连接错误:仔细确定一抗与二抗种属无误。

阅读:
上一条:免疫组化操作规程
下一条:细胞计数及活力测定
 相关新闻      
网站首页 | 顶部 | 打印 | 关闭
 
温州医学院生物学实验教学中心维护制作 版权所有:温州医学院生物学实验教学中心
©CopyRight 2007-2014 All Rights Reserved 联系方式:办公室电话:86699193 E-MAIL:sfzx@wzmc.net