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FCM 在生物医学工程学方面的应用5
[日期:2008-11-21]  来源:  作者: 
 

③ 对照组:众所周知,免疫组化的染色过程中,阴性和阳性对照是必不可少的。在准备用 FCM 分析的细胞时,对照标本的制备显得格外重要。因为一次用 FCM 分析的样品可能会很多,甚至多达上百个试管。对同一病人也可能会用到 20 ~ 30 个不同的单克隆抗体。每一个病人都要有相应的阴性对照。阴性对照主要用于仪器分析细胞之前,设立阴性和阳性的分界线。阳性对照主要用于检查染色方法。阳性 对照细胞选自那些已知的细胞和已知的单克隆抗体中的阳性反应最明显者。阴性对照细胞有以下几种:
1 )非染色细胞:直接染色法时,用 10μl PBS 代替与荧光结合的单克隆抗体,其它步骤相同。间接染色法时,分别用 10μl 的 PBS 代替第一抗体和荧光第二抗体,其它步骤相同。
2 )使用非特异性的抗小鼠膜表面免疫球蛋白( MsIg ),代替特异性的单克隆抗体。这是由于所使用的单克隆抗体来自小鼠,可能造成非特异性的假性反应,因此使用 MsIg 作为对照。同时还需要注意选择与实验用单克隆抗体亚类一致的 MsIg 。如大部分单克隆抗体为 IgG1 ,也有部分抗体为 IgM ,所以用 MsIg 作对照组时,往往使用 MsIgG 和 MsIgM 两种。直接染色法时,用 10μl 与荧光结合的 MsIg ,代替荧光单克隆抗体。间接染色时,用 10μl 无荧光的 MsIg 代替第一抗体。其它步骤与实验组相同。
3 )双染色对照:将各 10μl 的分别与红荧光染料和绿荧光染料结合的 MsIgg 或 MsIgM ,加入到同一个试管,代替荧光的特异性单克隆抗体,其它步骤相同。
4 )间接法对照:用 10μl 的 PBS 代替第一抗体。荧光第二抗体的浓度和使用量均与其它实验相同,其它实验步骤也和实验组相同。
二、白细胞免疫荧光分析的数据分析
在仪器调试和校准及标本制备完毕之后,就要做测试和数据分析工作。这里先讨论一下有关数据测量和分析的技术问题,而一些医学应用的具体参数的测量和分析后面做介绍。
1.0 。 散射和 90 。 散射的双指标的二维图像分析  可以把 0 。 和 90 。 散射分别选作二维图像的 X 轴和 Y 轴指标。通过图中数据点分布把全血分为淋巴细胞、单核细胞和粒细胞几个亚群(图 10-9 )。

图 10-9  人的外周血白细胞分群的二维点图
图中, A 、 B 图的淋巴细胞数大约有 6000 ~ 9000 个; C 、 D 图约有 2000 ~ 4000 个。分群编号依次表示: ① 红细胞、死细胞和渣滓; ② 淋巴细胞群; ③ 大颗粒淋巴细胞; ④ 单核细胞; ⑤ 粒细胞。数据是对 1000 个细胞分析得到的。

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