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FCM 在生物医学工程学方面的应用3
[日期:2008-11-21]  来源:  作者: 
 
表 10-1 是以胃粘膜为例比较正常细胞和胃癌细胞在 DNA 含量及细胞周期分布方面的差异。
表 10-1  正常与胃癌的胃粘膜细胞 DNA 含量方面的差异

二倍体

DNA 含量( % )

细胞周期分布( x±s )

非整倍体

G 0 /G 1

S 期

G 2 /M 期

正常细胞

100

0

88.9±1.2

5.0±0.6

3.4±0.7

胃癌患者细胞

0

100

77.3±1.8

10.9±1.1

7.4±0.7

  从表中看出差异是显著的。我国一些学者也提出有关 FCM 诊断癌肿细胞的细胞标准,并已付之临床应用。
目前,对于癌症病人预后评估的主要依据是病理组织学分级和临床分期等指标,不少人已认识到用 FCM 来检测 DNA 是对肿瘤预后评价的一个较为客观有效的指标。总的倾向是:异倍体的出现是恶性肿瘤的一个标志;异倍体肿瘤的恶性程度高、复发率高、转移率高及死亡率高;二倍体及近二倍体肿瘤预后较好。
在临床血液学方面的应用目前也以血液系统的肿瘤诊断、分型和预后关系等方面的应用为主;其主要技术途径也是基于对 DNA 倍体分析和细胞增殖周期的分析。限于篇幅不再多叙。有关的技术细节 将在下节 以 FCM 在外周血白细胞的免疫组织化学分析方面的应用为例详加介绍。
( 2 ) DNA 指数:由于 DNA 的非整倍体细胞是肿瘤的特异性标志已经得到肿瘤学界的公认,在些学者提出建议采用流式细胞术 DNA 分级指数( Flow cytometry DNA Crading Index, 简称 DNA 指数或 DI )表示 DNA 含量的异常程度。根据 1984 年国际分析细胞学会名词审定委员会的规定:

一般样品应采用同种或同个体的正常细胞为标准二倍体细胞。在血液学研究中通常以正常人外周血淋巴细胞作为标准二倍体细胞。需要指出的是,在报告 DNA 的测定结果时必需包括 G 0 /G 1 峰的变异和系数,即 C.V 值,若有多个 DNA 干 系则要给出各个 G 0 /G 1 峰的 C.V 值。用于肿瘤临床诊断的总体依据是: a. 正常二倍体的 DI=1.0 ,判断为阴性; b. 出现二个或多个可以分辨的 G 0 /G 1 峰则可判断为阳性; c. 虽无明显的 G 0 /G 1 峰的分化现象,但峰的 C.V 值较大,则可根据 DI 数个及其它有鉴别意义的征状给出参考性的诊断。
以上我们主要从 FCM 在生物医学工程学领域应用的基本原理和技术途径介绍了和组织化学有关的内容,至于一些技术细节 则在下节 做较为详细的说明。
FCM 对外周白细胞的免疫荧光分析
外周血是临床检验中的重要标本。 FCM 分析外周白细胞的主要目的是了解各种白细胞的数目与分群情况。这些数字的变化与临床的某些疾病有一定的关系。近年来,由于多种识别白细胞膜表面抗原的单克 隆抗体的发现,以及对这些单克隆抗体的直接或间接荧光标记物的出现,使得利用 FCM 的荧光组织化学分析获得被测细胞的多指标的更多、更准确的信息,这无疑对警觉临床和科研有很大帮助。本节 主要讨论有关外周血的白细胞的免疫荧光标记技 术、数据分析及临床应用等方面的问题。
一、白细胞的免疫荧光标记技术
1 .白细胞抗原下面给出世界卫生组织对白细胞抗原的统一命名,以及它们的分子量、对应的单克隆抗体及反应阳性的细胞(见表 10-2 )。
表 10-2 WHO 对白细胞分化抗原的命名


抗原

分子量

单克隆抗体

反应阳性细胞

CD 1

P45/12

Leu 6 ,T 6 ,OKT 6

胸腺细胞、朗格罕细胞

CD 2

P50

Leu 5 B,T 11 ,OKT 11

E 玫瑰花受体、 T 和 NK 细胞

CD 3

P19-29

Leu 4 ,T 3 ,OKT 8

T 细胞

CD 4

P55

Leu 3 ,T 4 ,OKT 4

协助 — 诱导 T 细胞,单核细胞

CD 5

P67

Leu 1 ,T 1 , T 101

T 细胞、 B 细胞亚群,慢粒(淋巴性)

CD 6

P120

T 12

T 细胞

CD 7

P41

Leu 9.3 A

T , T—ALL a 和 NK 细胞

CD 8

P32-33

Leu 2 ,T 6 ,OKT 8

抑制 - 细胞毒 T 细胞、 NK 细胞

CD 9

P24

BA-2

淋巴细胞白血病相关抗原

CD 10

P100

CALLA, J 5

粒细胞、前 B 白血病细胞

CD 11

P170/95

CR 3 /Leu 15 ,OKM 1

单核细胞、粒细胞、 NK 细胞

MO 1

T 细胞亚群( C 3 bi 受体)

CD 15

LNFP-I

LeuM 1

单核细胞、粒细胞、激活的 T 细胞

CD 16

P50~70

Leu 11

NK 细胞、粒细胞( IgGFc 受体)

CD 19

P95

Leu 12 ,B 4

B 、 CLL b 前 B-ALL 细胞

CD 20

P35

Leu 16 ,B 1

B 细胞

CD 21

P140

CR 2 ,B 7

B 细胞、 C 3 a 受体细胞

CD 22

P135

Leu 41

B 、 CLL 、和毛细胞白血病细胞

CD 23

P45

Blast 2

CD 24

P45 , P55

BA-1

B 、 CLL 和前 B-ALL 细胞

CD 25

P65

IL-2 受体

数分裂因子激活的 T 细胞 HTLV-I 、 II 、感染细胞

a :急性淋巴细胞性白血病; b :慢性淋巴细胞性白血病。

2 .样品的制备供 FCM 分析的样品是单细胞悬液,而且大部分样品都需经荧光染色。样品的制备方法大致有三种: ① 用荧光单克隆抗体染全血,随后溶解红细胞; ② 红细胞溶解后染色; ③ 通过梯度离心法分离出单个淋巴细胞和单核细胞,再将之制成细胞悬液染色。
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