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样品的一般处理步骤
[日期:2008-11-21]  来源:  作者: 
 

一、  细胞样品的一般处理步骤

1. 吸出培养液,用胰酶消化。

2. 加入 PBS , 1500 g离心 10 分钟,弃上清。重复 3 次。

3. 加入 5 倍体积裂解液,混匀(或在 2 × 10 6 细胞中,加入 1 ml裂解液)(或将 1 × 10 6 细胞悬于 60 ~ 100 ul裂解液中)。

4. 液氮中反复冻融 3 次。

5. 加 50ug/ml RNase 及 200ug/ml DNase ,在 4 ℃放置 15 分钟。

6. 15,000 转, 4 ℃离心 60 分钟(或 40,000 转, 4 ℃离心 30 分钟)。

7. 收集上清。

8. 定量后分装样品,冻存于- 70 ℃ 。

(一般情况下,用于做双向电泳的细胞数最好能达到 1*10 7 个,以保证得到足够蛋白质量)

二、组织样品的一般处理步骤

1. 碾钵碾磨组织,碾至粉末状(或将组织剪碎和裂解液混合后用匀浆器直接匀浆)

2. 将适量粉末状组织转移至匀浆器,加入适量裂解液,进行匀浆。

3. 加 50ug/ml RNase 及 200ug/ml DNase ,在 4 ℃放置 15 分钟。

4. 15,000 转, 4 ℃离心 60 分钟(或 40,000 转, 4 ℃离心 30 分钟)。

5. 收集上清。

6. 定量后分装样品,冻存于- 70 ℃。(如果样品不能马上进行电泳,还需要加入蛋白酶抑制剂,以防止部分蛋白质降解)

三、体液样品的一般处理步骤

? 血浆、血清标本中含有大量高丰度蛋白质,需要先除去,然后直接溶解在水化液中进行电泳,或者定量分装后保存在- 70 ℃ ,保存时间不宜过长。

2 、含盐较多的体液如尿液,脑脊液等需要先除盐(可选用透析、脱盐柱、丙酮沉淀,超速离心等方法)

3 、不经浓缩的脑脊液和羊水也能用于双向电泳,冻干会引起蛋白的修饰。

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