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超速离心机细胞分离的假象问题
[日期:2009-11-21]  来源:  作者: 
 

1 、细胞凝块(凝聚)现象:

1) 影响纯化,降低回收率。

2) 采用低细胞浓缩,增进组合,如白蛋白,血清, DNase (减少凝胶化),蛋白酶或 EDTA 于介质中。

3) 工作于 4 ℃ ,减少凝块,例:窦状活细胞,分离初期遭受到凝块,可采取工作稳定。

2 、含有细胞样品液超负载

1) 合适的细胞数量,不能超过梯度液容量。

1) 超负载细胞梯度液会造成宽区带。

3) 表面粘团,细胞沉淀。

3 、壁效应:

1)离心管不平行于离心管 - 固定角转头。

2) 由于本身密度梯度增进,引起干扰梯度的稳定性。

3) 增长从旋转中心到离心管间距梯度,减少壁效应,细胞丧失,或使用水平转头。

4 、漩涡

1) 离心管加 / 减速期间,会引起严重干扰梯度和分离区带。

2) 随着转头角速率动量的改变(加速)。造成液体旋转移动。

3) 增加从从旋转中心到离心管间距梯度,及慢加 / 慢减速。

4) 采用特殊的逆涡流进入腔体干涉 - 淘洗转。

5 、射流

1) 未处于离心,数分钟内样品微小滴从界面跌入进入梯度液

2) 减少细胞样品浓缩 / 加样量,增加样品 / 梯度界面梯度斜率

6 、离心力(特别是哺乳 动物细胞分离)

1) 细胞损伤随相当程度的离心力而定,主要表现为细胞周期内组织结构及活性的破坏和改变。

2) 多数类型细胞在几个小时离心后,出现破坏效应

3) 高离心力,快加速转头,细胞发生损伤(由于静力学压力而产生)

4) 减小离心力,采用细胞通过梯度迁移法

5) 低粘度介质,相对低离心力,确保最佳沉降速率

7 、渗透压效应:

1) 哺乳 动物细胞没有硬质的细胞壁,由于周围介质渗透压稍有微改变,将诱导细胞体变化

2) 过低或过高渗透压会引起细胞膨胀或收缩,将影响其密度及适当地沉降

3) 所有不同类型的细胞在离心整个时期,梯度必需具有相同的渗透压,通常渗透压与介质内的细胞活力有关,典型的渗透压大约为 290mOsm

4) 超过 450mOsm 以上,会引起细胞收缩,损伤活力

5) 过低渗透压导致细胞膨胀,引起超微结构组织,活力变化

6) 采用淘洗离心法,容量限制( 5 × 106 细胞)

(优点:特殊转头腔体,相对大的表面,有效的短距离沉降细胞,避免样品梯度液的铺陈,及收集时的漩涡和干扰。)

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